家蚕表皮酪氨酸酶和漆酶的分离纯化及酶学鉴定

• 作者: 刘晶晶 许维岸 贡成良 韩宏岩
• 来源期刊: 蚕业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 家蚕 酪氨酸酶 漆酶 分离纯化 酶学动力学特性
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 435-441
• 分类号: S881.2|Q55
• 字数: 5347字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0257-4799.2011.03.009

摘要

酚氧化酶是昆虫黑化反应的关键酶类.采用硫酸铵分级(20%～30%、40%～65%饱和度)沉淀以及ConA Sepharose 4B亲和层析和Sephacryl S-200凝胶过滤的方法,从家蚕蛹表皮样品中分离纯化出酪氨酸酶和漆酶,2种酶的比活力分别达到2 900、1 343 U/mg.经非还原SDS-PAGE电泳和酶学动力学特性分析表明:家蚕表皮酪氨酸酶的分子质量约80 kD,酶蛋白经凝胶电泳分离后用底物酪氨酸和邻苯二酚染色呈现棕褐色条带,该酶与2种底物的米氏常数(Km)分别是16.8 mmol/L和12.5 mmol/L,最适pH分别是6.5和7.5,最适温度均是30℃;家蚕表皮漆酶的分子质量约44kD,酶蛋白经凝胶电泳分离后用底物2,2'-氨基-二(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸盐)(ABTS)染色呈现蓝绿色,而用酪氨酸染色颜色没有变化,该酶与底物ABTS的Km值是32.7 mmol/L,最适pH5.0,最适温度50℃;酪氨酸酶的热稳定性比漆酶高.研究结果表明,采用硫酸分级沉淀、亲和层析和凝胶过滤方法能从家蚕表皮中分离纯化出漆酶和酪氨酸酶,酶学动力学分析二者对催化底物的特异性有差别,推测它们在家蚕表皮的硬化和黑化过程中发挥不同生理作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	贡成良	苏州大学基础医学与生物科学学院	136	1227	19.0	27.0
2	刘晶晶	苏州大学基础医学与生物科学学院	11	19	2.0	4.0
3	韩宏岩	苏州大学基础医学与生物科学学院	21	81	5.0	8.0
4	许维岸	苏州大学基础医学与生物科学学院	23	97	6.0	8.0