苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白cry2Ad2原核表达及其不同长度片段产物的杀虫活性

• 作者: 冯纪年 刘贤进 张存政 王耘 谢雅晶 赵龙龙
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 苏云金芽孢杆菌 Cry2Ad2蛋白 活性区 小菜蛾
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 植物保护
• 页码范围: 1242-1248
• 分类号: Q786
• 字数: 4822字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2011.06.013

摘要

该研究采用NCBI蛋白分析软件对Cry2Ad2蛋白序列进行分析,采用PCR克隆获得3种不同长度的cry2Ad2及全长cry2A d2基因片段,并将这些基因片段克隆到pET-26b载体上,构建重组质粒pET-Ad、pET-Ad1、pET-Ad2和pET-Ad3,再导人大肠杆菌BL21(DE3)中进行细胞周质诱导表达,并采用室内生物测定法测定表达产物对小菜蛾的毒力.Cry2Ad2蛋白的序列分析结果表明:全长的Cry2Ad2蛋白包含两个保守区域domain I(第53位～第264位氨基酸)和domainⅡ(第267位～第472位氨基酸),推测保守活性片段C端末端在N-端的第472位与第633位氨基酸之间.重组质粒pET-Ad、pET-Ad1、pET-Ad2和pET-Ad3在大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳验证分别含有约70000、52000、51000和54000的表达蛋白.生物活性初步测定结果表明:表达的Cry2Ad2、Cry2Ad2-1、Cry2Ad2-2及Cry2Ad2-3给药72h后对小菜蛾都具有杀虫活性,其中蛋白Cry2Ad2、Cry2Ad2-2与Cry2Ad2-3对小菜蛾有较强的毒性,相同剂量致死率分别为64.35％、53.27％和61.66％,统计分析表明蛋白Cry2Ad2-1与Cry2Ad2-3的致死率与蛋白Cry2Ad2的致死率无显著差异,(P＞0.05)；蛋白Cry2Ad2-2对小菜蛾的毒力相对较低,相同剂量致死率为39.89％,蛋白Cry2Ad2-2的致死率与蛋白Cry2Ad2的致死率差异显著(P＜0.05).鉴此,初步推断Cry2Ad2蛋白对小菜蛾的活性区在第49位与第463位氨基酸之间.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	冯纪年	西北农林科技大学植物保护学院	36	147	6.0	11.0
2	王耘	南京农业大学植物保护学院	2	5	2.0	2.0
3	赵龙龙	扬州大学生物科学与技术学院	1	2	1.0	1.0