含阿德福韦酯耐药突变位点的HBV聚合酶逆转录酶区域的原核表达

• 作者: 胡源 蔡雪飞 谢素兰 黄爱龙
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: HBV聚合酶 逆转录酶区域 阿德福韦酯 融合蛋白 原核细胞 基因表达
• 年，卷（期）: 2011,（8）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 893-897
• 分类号: R373.2+1|Q786
• 语种: 中文

摘要

目的 原核表达含阿德福韦酯(Adefovir,ADV)耐药突变位点的HBV聚合酶逆转录酶(Reverse transcriptase,RT)区域.方法 以野生型HBV DNA为模板,PCR扩增HBV聚合酶RT区域,克隆至质粒pHis-SUMO上,构建重组表达质粒SUMO-RTWT,并通过定点突变构建含ADV耐药突变位点(181T/ V十236T)的突变质粒SUMO-MT1和SUMO-MT2,转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)中,IPTG诱导表达.表达产物经SDS-PAGE及Western blot分析,并进行表达条件的优化及HBV聚合酶RT区域的结构建模.结果 重组表达质粒SUMO-RTWT、SUMO-MT1和SUMO-Mn经双酶切及测序证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为56000,可与鼠抗His单克隆抗体发生特异性结合;经表达条件优化后,3种重组质粒在大肠杆菌Roset-ta(DE3)中均获得有效稳定的表达;同源结构建模结果表明,HBV聚合酶RT区域具有典型的DNA聚合酶的结构.结论 已成功构建了含ADV耐药突变位点HBV聚合酶RT区域的重组原核表达质粒,并在大肠杆菌Rosetta(DE3)中获得稳定表达的可溶性目的 蛋白,为研究ADV的耐药机制奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄爱龙	重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室	236	1190	16.0	23.0
2	蔡雪飞	重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室	11	26	3.0	5.0
3	胡源	重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室	14	14	2.0	3.0
4	谢素兰	重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室	2	1	1.0	1.0