羊型布氏菌WbkC基因真核表达质粒的构建及鉴定

• 作者: 屈海龙 李晓艳 王兴龙 王景龙 王秀然 郎需龙
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 羊型布氏菌 WbkC基因 酵母菌,酿酒 真核细胞 基因表达
• 年，卷（期）: 2011,（8）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 889-892
• 分类号: R378.5|Q782
• 语种: 中文

摘要

目的 构建羊型布氏菌脂多糖0-侧链合成必需的甲酞基转移酶WbkC基因真核表达质粒,并进行鉴定.方法 提取16M株羊型布氏菌基因组DNA,KR扩增WbkC基因,克隆至psos载体上,构建诱饵重组质粒psos-WbkC,转化酵母菌株cdc25Ha,进行菌落PCR鉴定,并检测其在酵母双杂交系统中的自激活和定位情况.结果 诱饵重组质粒psos-WbkC经PCR双酶切及测序证明构建正确;重组酵母菌经PCR鉴定,可扩增出约780 by的目的 基因;诱饵质粒在酵母双杂交系统中无自激活且定位正确.结论 已构建了羊型布氏菌WbkC基因真核表达质粒psos-WbkC,可应用于酵母双杂交系统中,用于寻找巨噬细胞cDNA文库中与WbkC相互作用的蛋白质.