多年生黑麦草P5CS基因的定点突变及其在拟南芥中的转化

• 作者: 义鸣放 孙振元 巨关升 曹丽 韩蕾 马欣荣
• 来源期刊: 草业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 多年生黑麦草 定点突变技术 脯氨酸合成酶基因 农杆菌转化
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 242-247
• 分类号: S543+.603.53|Q943.2
• 字数: 3310字
• 语种: 中文

摘要

在前期克隆获得LpP5CS基因的全长cDNA序列基础上,采用PCR扩增技术对多年生黑麦草脯氨酸合成酶基因P5CS的定点突变体系进行了探讨,并运用农杆菌转化技术对突变后的基因进行了功能验证.根据突变位点序列设计一对引物,使用Pfu高保真DNA聚合酶和超级感受态细胞DMT,通过PCR扩增,获得含有所要突变位点的LpP5CSF128A,定向克隆人真核表达载体pCAMBIA130.中,转化拟南芥验证基因功能.结果表明,预期位点上发生了突变,LpP5CS编码的第128位密码子已由苯丙氨酸残基(Phenylalanine,简称Phe或F)变为丙氨酸残基(Alanine,Ala),证明用PCR技术已成功地使LpP5CS基因发生定点突变.转基因拟南芥T:代植株进行PCR和RT-PCR检测,获得4个转基因阳性株系.拟南芥T:代植株经100 mmol/L NaCI处理7d后,转基因株系脯氨酸含量分别为4 262和5 623 Ag/g FW,显著高于野生型株系的2 581 leg/g FW.说明转基因株系能积累更多地脯氨酸.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	马欣荣		35	697	13.0	26.0
2	义鸣放	中国农业大学观赏园艺与园林系	59	803	16.0	25.0