别藻蓝蛋白标记抗鸡IgG荧光抗抗体的高效制备与鉴定

• 作者: 张玉忠 朱丽萍 李雁冰 颜世敢
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 别藻蓝蛋白 蛋白质标记 荧光抗抗体
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医·水产养殖
• 页码范围: 110-115
• 分类号: S858.31
• 字数: 4676字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2011.01.021

摘要

将别藻蓝蛋白(Allophycocyanin,APC)与抗鸡IgG抗体交联制备荧光抗抗体,用于鸡疫病的间接荧光检测.首先采用羟基磷灰石层析和阴离子交换层析法高效制备APC,然后利用蛋白质交联技术高效制备荧光抗抗体.分别用摩尔比50:1、100:1的交联剂3-(2-吡啶二巯基)丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯(SPDP)将APC、抗鸡IgG抗体衍生,衍生物以摩尔比1:1液相交联,经高压液相色谱(HPLC)纯化制备出APC标记的抗鸡IgG荧光抗抗体,最后对制备的荧光抗抗体从荧光特性、吸收光谱特性、抗体活性、稳定性及纯度等方面进行鉴定.结果表明,APC标记的抗鸡IgG荧光抗抗体交联效率达95%以上,纯度达电泳纯,红色荧光明亮,抗体活性高,4 ℃保存90 d荧光亮度和抗体活性稳定.研制的APC标记的抗鸡IgG荧光抗抗体可作为通用荧光抗抗体用于鸡传染性疾病的间接免疫荧光检测.