垂穗披碱草ISSR反应体系的正交优化

• 作者: 刘新亮 德英 赵来喜
• 来源期刊: 草业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 垂穗披碱草 ISSR-PCR 正交优化
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 植物生产层
• 页码范围: 738-745
• 分类号: S543+.9|Q94-33
• 字数: 5786字
• 语种: 中文

摘要

以垂穗披碱草(Elymus nutans)基因组DNA为模板,对ISSR-PCR反应体系中5个因素(TaqDNA聚合酶、Mg2+、模板DNA、dNTPs、引物)进行优化试验.建立垂穗披碱草稳定的ISSR-PCR反应体系及最佳扩增程序.在25 μL反应体系中,最佳反应体系为2.5 μL 10×buffer(不含Mg2+)、1.0 U Taq酶、2.0 mmol/L Mg2+、30～120ng模板DNA、0.25 mmol/L dNTPs、0.25μmol/L引物.在优化体系的基础上筛选出11条多态性丰富.扩增稳定的引物,并通过设置退火温度梯度、循环次数梯度、延伸时间梯度.得到垂穗披碱草ISSR-PCR最佳扩增程序.反应程序:94℃预变性2 min,94℃变性1 min,51℃退火1min(视不同引物而定).72℃延伸1.5 min,共41个循环,72℃延伸10 min.通过对ISSR-PCR最佳反应体系和最佳扩增程序的验证.发现该反应体系和扩增程序具有较高的稳定性和较好的重复性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	德英	中国农业科学院草原研究所	15	82	6.0	8.0
2	赵来喜	中国农业科学院草原研究所	23	303	9.0	17.0
3	刘新亮	中国农业科学院草原研究所	3	20	3.0	3.0