一种适合转基因棉CpTI和crylA基因剂量测定的标准质粒的构建和应用

• 作者: 孙爻 彭于发 苏长青 谢家建
• 来源期刊: 作物学报
• 关键词: 抗虫棉 CpTI基因 crylA基因 基因特异性实时PCR 标准质粒
• 年，卷（期）: 2011,（9）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种·种质资源·分子遗传学
• 页码范围: 1533-1539
• 分类号: S562
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1006.2011.01533

摘要

在转基因检测领域,标准质粒以容易获得、纯度高、成本低和稳定性好的优点逐渐被广泛应用,适合同时检测多个靶标基因的需求.本研究针对我国抗虫棉(Gossypium hirsutum L.)的主要外源基因类型,构建含有豇豆胰蛋白酶抑制剂基因(CpTI)、苏云金杆菌晶体杀虫蛋白基因(crylA)和棉花内标准基因硬脂酰-酰基载体蛋白脱饱和酶基因(Sadl)的多靶标质粒pMD-CCS作为标准物质,建立了CpTI和crylA基因的实时荧光定量PCR方法.测定了我国9个抗虫棉品种中的CpPT和cryIA基因剂量,显示科棉3号等3个抗虫棉品种中CpTI基因的平均剂量为0.020～0.018拷贝/基因组,crylA基因的平均剂量为1.377～2.136拷贝/基因组；鄂杂棉1号F1等6个抗虫棉品种中crylA基因的平均剂量为0.887～2.564拷贝/基因组,定量结果的标准差(SD)范围在0.001～0.149之间.结果说明,pMD-CCS适合作为标准物质用于抗虫棉中CpTI和crylA基因的定量测定.