甲型H1N1流感病毒HA蛋白的截短表达、纯化及鉴定

• 作者: 史子学 沈阳 王晓杜 王皓婷 贾园 赵福广 邓绪芳 邱亚峰 邵东华
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 甲型H1N1流感病毒 HA蛋白 原核表达
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 22-25
• 分类号: S852.659.5
• 字数: 2855字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-5038.2011.05.006

摘要

构建pET表达载体,通过原核表达系统制备甲型H1N1流感病毒HA的截短表达蛋白,获得纯化蛋白,并分析HA蛋白的反应原性.人工合成A/California/04/2009 H1N1流感病毒HA基因,以其为模板,PCR扩增HA的一部分基因,去除HA蛋白信号肽、跨膜区、胞内区的基因序列,仅扩增HA1和HA2的基因.将扩增的基因构建到pET 28(a)质粒上,重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达HA蛋白,并经过Ni-NTA His Bind柱对其进行纯化,SDS-PAGE电泳鉴定HA蛋白的表达,Western blot 鉴定HA蛋白的反应原性.通过原核表达获得了HA的截短表达蛋白,并制备了较高纯度的蛋白,Western blot显示HA蛋白具有很好的反应原性,为建立甲型H1N1流感病毒检测技术奠定了基础.