肺炎支原体黏附蛋白P1羧基末端的原核表达及纯化

• 作者: 刘志强 王栋 陈禹保
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肺炎支原体 黏附蛋白 原核细胞 基因表达
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 672-675
• 分类号: R375+.2|Q786
• 语种: 中文

摘要

目的 原核表达并纯化肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,MP)黏附蛋白P1羧基末端.方法 提取MP FH型基因组DNA,以其为模板,PCR扩增P1羧基末端基因,插入原核表达载体pET-32a(+),构建重组表达质粒,转化E.coli Rosetta,IPTG诱导表达.表达的重组蛋白经镍离子亲和层析纯化后,进行SDS-PAGE、Western blot和ELISA鉴定.结果 重组表达质粒pET-32a-MP-PIC经PCR、双酶切及测序证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约55 900,以可溶性形式表达,表达量占菌体总蛋白的47%;纯化的重组蛋白纯度达94%以上,浓度为3.77 mg/ml,可与支原体肺炎患者血清特异性反应,经3 000倍稀释后,仍可与支原体肺炎患者血清发生阳性反应.结论 原核表达并纯化了MP黏附蛋白P1羧基末端,为进一步研究MP的致病机制及研发诊断试剂和基因疫苗奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘志强	湖南科技大学生命科学学院	34	377	12.0	18.0
2	王栋	湖南科技大学化学化工学院	4	23	2.0	4.0
3	陈禹保		4	6	1.0	2.0