2D-DIGE-HPLC-nESI MS/MS对2,4-二硝基苯磺酸损伤HaCaT细胞差异蛋白质的鉴定

• 作者: 侯志杰 刘淑清 孙明忠 杨帆 郭一萌 郭春梅
• 来源期刊: 分析测试学报
• 学科: 化学
• 关键词: 2,4-二硝基苯磺酸 职业暴露 2D-DIGE HPLC-nESI MS/MS HaCaT
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 页码范围: 146-151
• 分类号: O657.63|O629.7
• 字数: 3582字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-4957.2011.02.006

摘要

采用Cy2、Cy3和Cy5荧光染料标记蛋白,建立了人角质形成细胞HaCaT受2,4-二硝基苯磺酸(DNBS)刺激前后的双向胶内差异凝胶电泳(2D-DIGE)图谱,每组平行样本数为3.凝胶采用蛋白荧光染料Deep Purple进行后染色(Post-stain).DeCyder定量分析软件在每块凝胶上平均检测到1 200个以上蛋白斑点,每块胶上都匹配得到的相同蛋白质斑点有846个.其中有7个斑点丰度变化在50%以上,统计学意义显著(P值小于0.05).利用高效液相色谱-电喷雾串联质谱(HPLC-nESI MS/MS)成功鉴定5个表达上调的斑点分别为X染色体开放阅读框26(Cxorf26)、人辅分子伴侣23(PTGES3)、钙调蛋白(CALM3)、肌球蛋白轻链6(MYL6)和断裂点丛集区蛋白1(BANF1);2个表达下调蛋白斑点被鉴定为转录延伸因子B肽链2(TCEB2)和核糖体蛋白L23(RPL23).除MYL6被报道与皮肤疾病相关外,其它蛋白与皮肤病变的关系有待研究.该研究得到的7个差异表达蛋白为DNBS类化学致癌物职业接触者皮肤病变研究提供了有价值的线索.