棉铃虫中肠cDNA文库的构建及EST分析

• 作者: 吴孔明 张彦 张谦 曹广春 梁革梅 邹朗云 郭予元
• 来源期刊: 昆虫学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 棉铃虫 中肠 cDNA文库 表达序列标签(EST) 序列分析
• 年，卷（期）: 2011,（7）
• 所属期刊栏目: 生理与生化
• 页码范围: 739-745
• 分类号: Q966
• 语种: 中文

摘要

中肠是苏云金芽孢杆菌Bacillus thuringiensis(Bt)发挥作用的主要部位,中肠上很多蛋白被认为是Bt毒素的结合蛋白.为了探索棉铃虫Helicoverpa armigera对Bt的抗性机制,我们运用RNA转录过程中的5'末端转换机制(Switching Mechanism at 5'end of the RNA Transcript,SMART)技术构建了棉铃虫中肠的cDNA文库.先提取棉铃虫5龄幼虫中肠组织的总RNA,合成双链cDNA,经过均一化处理后,酶切、连接载体、转化到大肠杆菌Escherichia coli感受态细胞,最后进行滴度测试、文库扩增并进行EST序列测定.对该文库质量分析表明:文库滴度为2×10° pfu/mL,重组率为100%,平均插入片段大于1kb,全长率为50%.最终成功得到1 098条表达序列标签(expressed sequence tags,ESTs)序列,经Phrap程序聚类拼接后得到789条单基因簇(unigene),包括132个重叠群(congtigs)和657个单拷贝(singlets).将聚类拼接后的789条ESTs序列在NT,NR和SWISSPORT库中进行本地化搜索,比对后发现:218条序列(27.62%)没有注解;119条序列(15.08%)注解不明确;452条序列(57.29%)有功能注解,并表达300多种基因产物.构建的文库各项指标均达到要求,该文库的构建为棉铃虫中肠各类基因的克隆及功能分析奠定了基础.