血浆Ras相关区域家族蛋白1A基因甲基化在肝细胞癌分子诊断中的价值

• 作者: 余坚 华东 程之红 胡瑜 费伯健 黄朝晖
• 来源期刊: 肿瘤
• 学科: 医学
• 关键词: 癌,肝细胞 DNA甲基化 血浆 分子诊断技术 聚合酶链反应 限制性内切酶 Ras相关区域家族蛋白1A
• 年，卷（期）: 2011,（8）
• 所属期刊栏目: 临床研究
• 页码范围: 742-747
• 分类号: R735.7
• 字数: 3923字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3781/j.issn.1000-7431.2011.08.012

摘要

目的:建立一种可检测微量DNA标本中DNA甲基化的甲基化敏感性限制性内切酶-定量PCR(methylation-sensitive restriction enzymes-based quantitative PCR,MSRE-qPCR)方法,并运用该技术探讨血浆Ras相关区域家族蛋白1A(Ras association domain family 1A,RASSFL4)基因甲基化检测在肝细胞癌(hepatocellutarcarcinoma,HCC)非侵入性诊断中的价值.方法:用MSRE Hba I消化DNA样品,再用qPCR技术分析酶切结果,建立检测RASSF1A基因甲基化的MSRE-qPCR方法.以45例肝组织(20对HCC患者手术切除肿瘤标本及匹配非癌组织和5例正常肝)为材料,测试该方法的应用价值;运用亚硫酸氢盐测序PCR(bisulfite sequencing PCR,BSP)技术进行进一步验证,并与甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)方法相比较.再运用该技术检测150例血浆标本(包括72例HCC患者、37例肝硬化或慢性肝炎等良性病变患者和41例健康对照)的RA88F1A基因甲基化状态,并分析其与HCC患者临床病理参数的关系.结果:MSRE-qPCR法可定量检测低至1%以下的RASSF1A甲基化片段.20例HCC组织中有14例(70%)发生RASSF1A高甲基化,对应非癌组织中RASSF1A甲基化阳性率为25%,而5例正常肝组织均为阴性.MSRE-qPCR结果经BSP验证无误,且与MSP检测结果具有较好的一致性.HCC患者血浆RA88F1A甲基化阳性率(47/72,65.3%)显著高于健康对照(1/41,2.4%)和肝良性病变组(3/37,8.1%),差异均有统计学意义(P<0.000 1).联合检测血浆RASSF1A甲基化与血清AFP可显著提高HCC诊断效率.结论:建立的MSRE-qPCR方法要求样本少、操作简便、成本低廉,可定量检测RASSF1A基因甲基化水平.血浆RA88F1A甲基化分析对于HCC的非侵入性诊断具有重要价值.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	费伯健	苏州大学附属第四医院肿瘤研究所	14	72	5.0	8.0
2	黄朝晖	苏州大学附属第四医院肿瘤研究所	44	217	8.0	10.0
3	华东	苏州大学附属第四医院肿瘤研究所	54	256	8.0	11.0
4	胡瑜	苏州大学附属第四医院肿瘤研究所	9	69	6.0	8.0
5	程之红	苏州大学附属第四医院肿瘤研究所	5	18	3.0	4.0
6	余坚	上海市肿瘤研究所癌基因及相关基因国家重点实验室	4	23	3.0	4.0