食管鳞癌中微小核糖核酸-21的作用及对靶蛋白的影响

• 作者: 伊力亚尔·夏合丁 刘涛 刘清 卢晓梅 郑树涛 阿孜古丽·吐尔逊 马文静 马正海
• 来源期刊: 中华消化杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 癌,鳞状细胞 食管肿瘤 微小核糖核酸 寡核苷酸类,反义 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2011,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 536-539
• 分类号: R714.255
• 字数: 2602字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-1432.2011.08.008

摘要

目的 探讨微小RNA(miRNA)-21对食管鳞癌细胞Eca109和哈萨克族食管癌的促增殖作用及对程序性细胞死亡基因4(PDCD4)表达的影响。方法将食管鳞癌细胞系Eca109分为miRNA-21 Mimics组（转染序列5′-UCAACAUCAGUCUGAUAAGCUA-3′）、miRNA-21抑制剂组（转染序列5′-UAGCUUAUCAGACUGAUGUUGA-3′）、阴性对照组（转染随机序列）和正常对照组（不予转染等任何处理）。细胞按4.5×105个/孔接种于6孔板，基于RNA干扰(RNAi)技术、使用脂质体2000试剂进行细胞转染。采用细胞计数法检测转染后各组细胞的增殖情况。使用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组细胞的miRNA-21转录水平。采用Western印迹技术检测转染后各组PDCD4蛋白表达情况。检测18对哈萨克族食管癌及其对应的癌旁正常食管组织中miRNA-21转录和PDCD4蛋白表达情况。结果 转染48 h后，与正常对照组比较，miRNA-21Mimics组Eca109细胞数增加36％(P=0.002)，miRNA-21抑制剂组细胞数减少28％(P=0.002)，阴性对照组细胞数变化不明显(P=0.515)。转染48 h后，miRNA-21抑制剂组、miRNA-21 Mimics 组、阴性对照组、正常对照组miRNA-21的相对表达量分别为0.37±0.10、9.17±1.08、0.74±0.23和1.04±0.34,PDCD4蛋白相对表达量分别为1.47±0.11、0.61±0.09、0.89±0.12、0.79±0.02。与正常对照组比较，miRNA-21抑制剂组miRNA-21相对表达量下降(P=0.031)、PDCD4蛋白相对表达量上调（P=0.001），miRNA-21 Mimics组miRNA-21相对表达量上升(P=0.001)、PDCD4相对表达量下调(P=0.030)，阴性对照组则差异无统计学意义（P值分别=0.272和0.541）。18对哈萨克族食管癌组织中16对的miRNA-21相对表达量(0.11±0.09)高于其对应的癌旁正常食管组织(0.03±0.03，P=0.001)，PDCD4蛋白相对表达量（0.92±0.39）低于其对应的癌旁正常食管组织（1.57±0.80，P=0.004），且癌组织中miRNA-21相对表达水平越高，PDCD4蛋白相对表达水平越低（r=-0.538，P=0.046）。结论miRNA-21可能通过抑制PDCD4蛋白表达而促进食管鳞癌细胞Eca109增殖，并且参与哈萨克族食管癌的发生。