副猪嗜血杆菌转铁结合蛋白A基因的分段表达及其免疫原性分析

• 作者: 李郁 辛伟 魏建忠 黄晓慧
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 副猪嗜血杆菌 转铁结合蛋白A基因 表达 免疫原性鉴定
• 年，卷（期）: 2011,（12）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 1743-1749
• 分类号: S852.61
• 字数: 5458字
• 语种: 中文

摘要

本研究旨在获得副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)转铁结合蛋白A基因(tbpA)的表达产物(TbpA),并对其免疫原性进行分析鉴定.采用生物信息学方法预测HPS的TbpA抗原表位,根据GenBank上发表的HPS(SH0165株)tbpA的核苷酸序列设计合成3对引物,用PCR从安徽省HPS分离株(LJ3) tbpA中分段扩增出tbpA1、tbpA2和tbpA3,并连接到pET-32a(+)载体上,经BamH Ⅰ和EcoRⅠ双酶切鉴定和测序确认,将重组质粒转化大肠杆菌BL21 (DE3)中,进行IPTG诱导表达.利用SDS-PAGE检测目的蛋白,Western blotting分析重组蛋白的免疫活性；通过小鼠免疫攻毒保护试验和血清杀菌力试验,鉴定重组蛋白的免疫原性以及诱导机体产生保护性免疫反应的能力.结果表明,从HPS(LJ3)tbpA中扩增出与预期设计的1140、897、666 bp大小相符的3个片段(tbpA1、tbpA2、tbpA3),扩增产物连接载体得到重组质粒,在大肠杆菌中实现表达,获得大小为62、54、44 ku的目的蛋白(rTbpA1、rTbpA2、rTbpA3),均能与HPS阳性血清反应.rTbpA1与甲醛灭活菌体对小鼠免疫攻毒的保护率分别为20％和40％,但rTbpA1引起小鼠平均死亡时间显著延迟,兔抗rTbpA1与兔抗HPS(LJ3)血清具有同样显著的杀菌活性.结果显示,成功表达的rTbpA1、rTbpA2、rTbpA3均具有良好的反应原性,其中rTbpA1更具有良好的免疫原性以及诱导机体产生保护性免疫反应的能力,可望成为副猪嗜血杆菌病疫苗和血清学检测的候选成分.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李郁	安徽农业大学动物科技学院	140	887	14.0	23.0
2	魏建忠	安徽农业大学动物科技学院	126	1011	16.0	24.0
3	黄晓慧	安徽农业大学动物科技学院	5	38	4.0	5.0
4	辛伟	安徽农业大学动物科技学院	1	6	1.0	1.0