以蛋白质磷酸酶CDC25A/B为靶标的抗癌药筛选体系的构建

• 作者: 张丽君 张页 李常虹 赵翔
• 来源期刊: 山东医药
• 学科: 医学
• 关键词: 靶向抗癌药 CDC25磷酸酶 GST融合蛋白 高通量筛选 对硝基苯磷酸盐
• 年，卷（期）: 2011,（28）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 8-11
• 分类号: R979.1
• 字数: 3022字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2011.28.005

摘要

目的 通过克隆和表达人蛋白质磷酸酶CDC25A/B融合蛋白,探讨构建高通量靶向抗癌药筛选体系的途径.方法 采用RT-PCR技术克隆人CDC25A/B催化区结构域cDNA序列,构建pGEX-4T-1-CDC25A/B原核表达质粒,表达和纯化携带还原型谷胱甘肽(GSH)标签的融合蛋白.以对硝基苯基磷酸盐(pNPP)为底物,在96孔板上建立分别以GST-CDC25A/B为靶标的筛选体系,应用维生素K3(VK3)进行验证性抑制剂筛选.结果 成功表达和纯化了GST-CDC25A/B融合蛋白,建立了相应的高通量磷酸酶抑制剂筛选体系.在相同反应条件下,GSTCDC25B对pNPP的水解活性是GST-CDC25A的6倍.VK3对CDC25A/B的半数抑制浓度(IC50)分别为0.8和1.8μg/ml.结论 通过表达和纯化CDC25A/B催化区结构域与GST的融合蛋白,可以高效率的建立靶酶抑制剂高通量筛选体系,为进一步研发VK3衍生物类新型靶向抗癌药奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵翔	北京大学基础医学院	18	92	7.0	9.0
2	张页	北京大学基础医学院	18	104	7.0	9.0
3	张丽君	北京大学生命科学学院	10	44	3.0	6.0
4	李常虹	北京大学基础医学院	25	83	6.0	7.0