人谷氨酰胺:6-磷酸果糖酰胺转移酶的体外表达、纯化及活性检测

• 作者: 刘倩 叶菲 张晓琳 田金英 金晶
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 谷氨酰胺∶6-磷酸果糖酰胺转移酶 原核表达 生物活性
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 612-616
• 分类号: Q78
• 字数: 4529字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2011.05.003

摘要

目的:制备重组谷氨酰胺∶6-磷酸果糖酰胺转移酶(GFAT),检测其活性.方法:利用RT-PCR扩增人肝脏cDNA中GFA T1基因全长片段,克隆到表达载体pET32b中；在大肠杆菌Origami (DE3)中诱导表达,用镍离子螯合柱(Ni-NTA)纯化重组GFAT1；用体外酶学的方法检测GFAT的活性.结果:构建了pET32b-GFAT1质粒,经诱导表达及纯化,得到具有一定生物活性的GFAT.结论:利用原核表达系统可得到具有良好生物学活性的重组人GFAT1.