酵母双杂交筛选心脏cDNA文库中与人热激蛋白70相互作用的蛋白质

• 作者: 冷雪 刘晓华 商艳芬 张志清 段梦 王立群 钱令嘉
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 热激蛋白70 酵母双杂交系统 自激活活性 相互作用蛋白质
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 379-383
• 分类号: Q78
• 字数: 3252字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2011.03.017

摘要

目的:利用酵母双杂交系统从人心肌cDNA文库中筛选与热激蛋白70(HSP70)相互作用的蛋白质.方法:从人心脏cDNA文库扩增Hsp70基因,克隆于pGBKT7载体上,酶切鉴定及序列分析,并检测pGBKT7-Hsp70酵母细胞AH109中的自激活活性;将构建的酵母表达诱饵质粒载体pGBKT7-Hsp70转化AH109酵母细胞,与转化有人心脏cDNA文库的酵母Y187进行交配实验,筛选与HSP70相互作用的蛋白质,通过一对一的回复杂交实验排除假阳性,对阳性克隆进行序列测定和生物信息学分析.结果:构建了"诱饵"质粒载体pGBKT7-Hsp70,并证明其在酵母双杂交系统中无自激活活性,筛选得到多个与Hsp70相互作用的阳性转化子,并最终得到HSP70的1个相互作用蛋白质HIP.结论:应用酵母双杂交系统筛选出与HSP70相互作用的1个蛋白质,它们的相互作用可能与HSP70发挥细胞分子伴侣作用有关.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	钱令嘉	军事医学科学院卫生学环境医学研究所	95	941	18.0	26.0
2	刘晓华	军事医学科学院卫生学环境医学研究所	17	66	3.0	7.0
3	张志清	军事医学科学院卫生学环境医学研究所	9	42	3.0	6.0
4	冷雪	军事医学科学院卫生学环境医学研究所	14	59	3.0	7.0
5	商艳芬	军事医学科学院卫生学环境医学研究所	2	3	1.0	1.0
6	王立群	军事医学科学院卫生学环境医学研究所	7	6	2.0	2.0
7	段梦	军事医学科学院卫生学环境医学研究所	2	2	1.0	1.0