N-酰基高丝氨酸内酯降解酶的抗体制备与鉴定

• 作者: 刘凤权 李婷 杨雪 牛毅 胡白石 范加勤 谷春艳 钱国良
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 生物学
• 关键词: aiiA attM AHLs解酯酶 蛋白表达 蛋白免疫
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 所属期刊栏目: 植物保护
• 页码范围: 276-281
• 分类号: Q786|Q939.91
• 字数: 4209字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2011.02.008

摘要

根据已报道的aiiA基因及attM基因序列设计引物,分别从蜡质芽孢杆菌(Bacillus cereus)和土壤根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)中PCR扩增获得aiiA基因及attM基因,构建蛋白表达载体pET30a-aiiA及pET30a-attM,在大肠杆菌BL21中诱导表达.利用AiiA解酯酶蛋白和AttM解酯酶蛋白在SDS-PAGE中对应的产物直接成兔免疫,提取血清进行ELISA和Western Blot检测.SDS-PAGE检测发现aiiA基因及attM基因能高效表达AiiA解酯酶蛋白和AttM解酯酶蛋白.ELISA检测结果表明,抗体含量高,稀释106倍依然为有效值.Western Blot 检测结果表明抗体可特异性结合目的蛋白.应用检测结果表明抗体血清能检测到N-酰基高丝氨酸内酯降解酶相关基因的产物,在验证群体感应和群体淬灭等方面将具有应用价值.