siRNA下调EIF4E基因对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和周期的影响

• 作者: 叶维霞 孙阳阳 曹友德 磨娜
• 来源期刊: 肿瘤
• 学科: 医学
• 关键词: 乳腺肿瘤 RNA,小分子干扰 细胞凋亡 真核细胞翻译起始因子 细胞,MDA-MB-231
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 197-202
• 分类号: R737.9
• 字数: 4871字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3781/j.issn.1000-7431.2011.03.003

摘要

目的:应用小干扰RNA (small interfering RNA,siRNA)乳腺癌MDA-MB-231细胞中真核细胞翻译起始因子4E' (eukaryotic translation initiation factor 4E,EIF4E)基因的表达,探讨其对乳腺癌细胞增殖和生长周期的影响.方法:构建针对EIF4E基因的siRNA表达质粒,采用脂质体法将表达质粒pGPU6/GFP/Neo-EIF4E转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞;分别采用RT-PCR,Western印迹法和免疫细胞化学法检测转染EIF4E siRNA后,对MDA-MB-231细胞中EIF4E及cyclinD1 mRNA和蛋白的表达水平的影响;MTT法、平板克隆形成实验和FCM检测MDA-MB-231细胞增殖活性、克隆形成率及细胞周期.结果:成功构建EIF4E siRNA表达质粒.RT-PCR,Western印迹法和免疫细胞化学法检测结果显示,MDA-MB-231细胞中EIF4E及cyclinD1 mRNA和蛋白表达均明显下降(P<0.05).转染EIF4EsiRNA组细胞生长缓慢,集落形成数明显减少,与空白对照组和转染空载体组比较,差异有统计学意义(P<0.05).FCM检测结果显示,EIF4E siRNA转染组G,期细胞所占百分比为(71.30±0.47)%,较空白对照组的(53.10±0.43)%明显增加,而S期细胞所占百分比为(12.53±0.13) %,较空白对照组的(26.47±0.38) %明显减少(P<0.05).结论:EIF4E siRNA可显著下调EIF4E基因在乳腺癌MDA-MB-231细胞中的表达水平,在一定程度上抑制乳腺癌细胞的增殖,有可能成为临床治疗乳腺癌的靶点之一.