人源Fab段噬菌体抗体库的构建及抗IL-4抗体的初步筛选

• 作者: 公倩 朱铁虹 畅继武 胡占东
• 来源期刊: 天津医药
• 关键词: 淋巴细胞 细菌噬菌体 遗传工程 免疫球蛋白Fab片段 白细胞介素4 逆转录聚合酶链反应
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 493-495,后插2
• 分类号: R392
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0253-9896.2011.06.005

摘要

目的:构建大容量人源Fab段噬菌体抗体库,从中筛选抗白细胞介素(IL)-4的抗体元件,为人源抗体的制备建立平台.方法:采集18例健康成人外周血,分离淋巴细胞,从中提取总RNA,用逆转录聚合酶链反应(HT-FCR)法扩增Fab段抗体基因,插入噬菌粒pComb3XSS载体内,构建噬菌体抗体元件库,用内切酶鉴定基因片段的插入.以抗原IL-4对抗体库进行富集筛选.筛选后,随机抽取菌株通过噬菌体-酶联免疫吸附法(Phage-ELISA)进行检测,并且对阳性克隆DNA的序列进行测定.结果:构建的人源Fab段噬菌体抗体库库容为2.4×108,酶切鉴定插入基因片段大小正确,从中筛选到与IL-4有结合活性的克隆.ELISA特异鉴定阳性,测序结果证实为人免疫球蛋白可变区基因片段.结论:成功构建了大容量人源化噬菌体抗体元件库,并初步获得人源性抗IL-4-Fab抗体,为大规模制备人源IL-4抗体和检测血中IL-4水平奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	畅继武	天津医科大学第二医院泌尿外科研究所	59	139	6.0	8.0
2	朱铁虹		39	187	7.0	12.0
3	胡占东	天津医科大学第二医院泌尿外科研究所	2	1	1.0	1.0
4	公倩		3	5	1.0	2.0