人脐静脉内皮细胞Caveolin-1基因沉默模型的建立

• 作者: 张友其 彭韦霞 文芳 曹仁贤 杨慧龄 颜斌
• 来源期刊: 现代医药卫生
• 学科: 医学
• 关键词: Caveolin-1 人脐静脉内皮细胞 siRNA 慢病毒表达系统
• 年，卷（期）: 2011,（13）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 1924-1927
• 分类号: R5
• 字数: 3305字
• 语种: 中文

摘要

目的:利用小干扰RNA(siRNA)技术建立人脐静脉内皮细胞(ECV304)小凹蛋白(Caveolin-1)基因沉默模型,为研究Caveolin-1基因在人脐静脉内皮细胞中的作用.方法:通过Ambion专用软件对Caveolin-1基因编码区分析,设计合成短发夹RNA(shRNA)单链.通过T4连接酶将退火反应合成的shRNA双链克隆入含RNA PollII聚合酶表达元件的pENTRTM/U6入门载体,并利用Gateway技术构建相应的慢病毒RNA干扰(RNAi)表达载体.用REAL-TIME RT-PCR、蛋白印迹法分析沉默效率.结果:测序结果显示pENTRTM/U6载体插入的Cavelin-1基因shRNA序列大小及阅读框架正确.LR重组反应后成功构建了针对Caveolin-1基因的RNAi慢病毒表达系统.转染ECV-304细胞获得对Caveolin-1的沉默效率大于85%.结论:成功地构建了针对Caveolin-1基因的RNAi慢病毒表达系统,获得了长期稳定的基因剔除效应.人脐静脉内皮细胞Caveolin-1基因沉默模型能长期保种及传代,为进一步研究Cav-eolin-1基因的功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张友其	益阳市中心医院内分泌科	2	7	1.0	2.0
2	彭韦霞	益阳市中心医院内分泌科	8	20	3.0	4.0
3	文芳	衡阳市南华大学附属第一医院内分泌科	1	0	0.0	0.0
4	曹仁贤	衡阳市南华大学附属第一医院临床研究所	1	0	0.0	0.0
5	杨慧龄	衡阳市南华大学附属第一医院临床研究所	1	0	0.0	0.0
6	颜斌	衡阳市南华大学附属第一医院内分泌科	1	0	0.0	0.0