手足口病病原微生物EV71病毒株的分离与鉴定

• 作者: 刘志学 刘特 张鑫瑜 李宁丽
• 来源期刊: 中国临床医学
• 学科: 医学
• 关键词: 手足口病 EV71病毒 病毒分离鉴定
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 275-278
• 分类号: R446.9
• 字数: 3968字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-6358.2011.03.002

摘要

目的:探讨手足口病病原体EV71病毒的分离方法.方法:取手足口病患儿的粪便,经磷酸盐缓冲液(PBS)稀释后用0.22 μm滤膜过滤,将悬液接种于Vero细胞.通过EV71病毒致细胞病变效应(CPE)分析、电镜分析、EV71病毒特异性核酸及蛋白的聚合酶链反应(PCR)及Western Blotting分析来鉴定病毒分离和致病效果.检测病毒悬液对于宿主细胞Vero增殖抑制的效果.结果:标本悬液接种Vero细胞48 h后出现CPE.收集感染细胞的培养基上清液,连续感染2次,均出现同样的CPE.电镜检测发现在感染组Vero细胞的细胞质和细胞核周围均有大量聚集的病毒颗粒.EV71特异性核酸RT-PCR检测证实,感染组Vero细胞中可以扩增出EV71病毒特异性的核酸条带.Western Blotting检测发现,在感染组细胞中有高表达EV71特异性抗原蛋白,而未感染组细胞不表达该病毒抗原.MTT检测结果显示,EV71病毒显著抑制宿主细胞Vero的体外增殖和生长,并且呈时间依赖性.结论:成功分离出人手足口病致微生物EV71病毒株(该EV71病毒株编号为EV71-Tj-100623).

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘志学	同济大学生命科学与技术学院	25	186	7.0	12.0
2	刘特	上海交通大学医学院	16	86	5.0	9.0
4	李宁丽	上海交通大学医学院	31	281	9.0	16.0
7	张鑫瑜	上海交通大学医学院	1	3	1.0	1.0