靶向人乳头瘤病毒18E6的短发夹结构RNA慢病毒载体的构建

• 作者: 张灏 瞿全新 糜若然 罗远材
• 来源期刊: 天津医药
• 关键词: 人乳头瘤病毒18 癌基因 RNA干扰 质粒 转染 HeLa细胞 逆转录聚合酶链反应
• 年，卷（期）: 2011,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 813-816
• 分类号: R373.9
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0253-9896.2011.09.013

摘要

目的:构建含有靶向人乳头瘤病毒18型E6癌基因(HPV18E6)的短发夹结构RNA(shRNA)的慢病毒载体.方法:根据HPV18E6癌基因的相关信息,设计并合成shRNA干扰序列,连人pGCSIL-GFP质粒,构建并鉴定含有shRNA的重组质粒pGC-shRNA;将重组质粒pGC-shRNA和病毒包装质粒pHelper 1.0、pHelper 2.0共转染293T细胞,进行病毒包装,收集病毒液并进行浓缩、纯化；所得病毒液感染293T细胞,测定病毒滴度,并验证其对宫颈癌HeLa细胞HPV18E6癌基因的干扰效果.结果:HPVISE6的shRNA干扰序列与人类基因组没有同源性,此插入序列转录后得到的RNA二级结构能形成发夹状结构；重组质粒pGC-shRNA经PCR鉴定及DNA测序结果显示该重组质粒构建成功；成功对病毒进行包装、浓缩及纯化后,所得病毒滴度为3×108TU/mL,并能很好地抑制HPV18E6癌基因的表达.结论:成功构建了HPV 18E6-RNAi-LV慢病毒载体,为后续RNA干扰研究的开展提供了工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	糜若然	天津医科大学总医院妇产科	180	1159	17.0	24.0
2	瞿全新	天津市第一中心医院妇产科	34	161	8.0	11.0
3	张灏	天津医科大学基础医学院细胞形态学教研室	9	41	5.0	6.0
4	罗远材	天津市第一中心医院妇产科	19	63	4.0	7.0