抗肿瘤坏死因子-α单链抗体在大肠杆菌中的表达及表达条件的优化

• 作者: 张栋 杨利军 杨涛 牛勃 王惠珍
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 单链抗体 肿瘤坏死因子-α 大肠杆菌 基因表达
• 年，卷（期）: 2011,（11）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1273-1277
• 分类号: Q786
• 语种: 中文

摘要

目的 构建抗肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)单链抗体(Single chain fragment variable,scFv)的原核高效表达体系,并优化表达条件.方法 在引物中添加编码6×His的核苷酸片段,使目的蛋白C-末端带有6×His标签.从质粒pCANTAB 5E-scFv中PCR扩增scFv基因,连接至pBV220载体,连接产物分别转化至E.coli BL21(DE3)和DH5α中,42℃诱导表达,并对诱导时间、培养基pH值和类型进行优化,Western blot分析表达产物的反应原性.结果 PCR扩增出的scFv基因片段长度约770 bp,且序列正确；重组表达质粒pBV220-scFv经酶切鉴定证明构建正确；在E.coli BL21( DE3)中可获得表达,在E.coli DH5α中不表达；表达的重组scFv相对分子质量约为28 000,以包涵体形式存在于胞浆中,表达量约占菌体总蛋白的15％,且可与抗His-Tag抗体发生特异性反应；工程菌的最佳诱导表达条件为:以E.coli BL21 (DE3)为宿主菌,在pH7.4的LB培养基中,42℃诱导5h.结论 将scFv的表达载体更换为pBV220,可提高scFv的表达量,在优化表达条件下,scFv的表达水平进一步提高.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	牛勃	山西医科大学生物化学与分子生物学教研室	129	688	13.0	20.0
3	杨涛	山西医科大学生物化学与分子生物学教研室	102	335	10.0	13.0
4	王惠珍	山西医科大学生物化学与分子生物学教研室	47	238	9.0	13.0
6	张栋	山西医科大学生物化学与分子生物学教研室	39	148	7.0	10.0
7	杨利军	山西医科大学生物化学与分子生物学教研室	48	218	7.0	13.0