SB转座子介导的hLF乳腺表达载体的构建及鉴定

• 作者: 孟立 宋洋 张国敏 张艳丽 王子玉 王昌龙 王锋 钟部帅 闫益波 黄荣
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 生物学
• 关键词: “睡美人”(SB)转座子 β-乳球蛋白 乳腺表达载体 乳腺上皮细胞
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医·水产养殖
• 页码范围: 795-801
• 分类号: Q785
• 字数: 4699字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2011.04.018

摘要

构建了以睡美人( Sleeping beauty,SB)转座子为载体元件、β-乳球蛋白质(β-lactoglobulin,BLG)为调控区的人乳铁蛋白质(Human lactoferrin,hLF)乳腺表达载体及增强型绿色荧光蛋白质(EGFP)表达载体,便于验证SB转座子的转座效率,为hLF乳腺表达载体成功转染乳腺上皮细胞(GMC)奠定基础.采用PCR法从绵羊基因组中扩增5′、3′BLG,经TA克隆,在中间载体pcDNA3.1(-)的作用下,与hLF连接,得到pcDNA3.1(-)-BLG-hLF,然后与pT2连接,构建pT2-BLG-hLF；此外,还构建了pT2-BLG-EGFP.采用测序、酶切、PCR 3种方法鉴定阳性克隆,并用脂质体法将pT2-BLG-EGFP转染至GMC细胞中进行观察.分子鉴定结果:5′BLG、3′BLG克隆成功,pT2-BIG-hLF及pT2-BLG-EGFP构建正确；细胞鉴定结果:SB转座子介导的EGFP能在GMC细胞中高效表达.成功克隆了5′BLG、3′BLG调控区,并成功构建了乳腺表达载体pT2-BLG-hLF.