肠出血性大肠杆菌O157∶H7鞭毛可变区基因片段的克隆、表达与免疫原性

• 作者: 何孔旺 俞正玉 倪艳秀 叶青 吕立新 周俊明 张雪寒 李彬 栾晓婷 温立斌 王小敏 茅爱华 赵攀登 郭容利
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 肠出血性大肠杆菌O157∶H7 flic基因 表达 小鼠
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医·水产养殖
• 页码范围: 1021-1025
• 分类号: Q78
• 字数: 3406字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2011.05.019

摘要

肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)O157∶H7是食源感染的人兽共患病原菌.鞭毛蛋白(H7)是EHEC O157∶H7重要的毒力因子,其编码基因为flic.该研究在体外克隆和表达flic基因的可变区,并检测其免疫原性,旨在为EHEC O157∶H7疫苗的研制提供候选抗原.PCR扩增到flic基因538～1 483bp的可变区,成功克隆入冷诱导表达载体pCold Ⅰ中,构建重组表达质粒.重组菌BL21(pCold Ⅰ-flic)0.5mmol/LIPTG过夜诱导,SDS-PAGE和Western blotting进行鉴定.Balb/c小鼠免疫和攻毒试验评价重组H7蛋白的免疫原性.结果显示:H7基因(flic)片段945 bp在pCold Ⅰ中成功表达,大小为31 000,能够与天然EHEC O157∶H7全抗血清反应;免疫小鼠存活率可以达到80％,而非免疫小鼠存活率仅为20％;免疫组粪便排菌数最显著低于对照组(P＜0.05).以上结果说明,H7鞭毛的可变区与菌体黏附密切相关,并且其诱导产生的抗体具有一定的抑制黏附作用,可以作为亚单位疫苗研制的候选抗原,在EHEC O157∶H7早期黏附时,协同Ⅲ型分泌系统蛋白降低菌体在肠道内的黏附.