ω-3脂肪酸脱氢酶基因Fat-1的真核表达载体构建与表达

• 作者: 刘军 张博伟 张涌 战丽萍 郑聪颖
• 来源期刊: 西北农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: ω-3脂肪酸脱氢酶 不饱和脂肪酸 真核表达载体 牛胎儿成纤维细胞
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 18-23
• 分类号: Q782|S823.9
• 字数: 4440字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-1389.2011.01.004

摘要

培养线虫(Caenorhabditis elegans),提取RNA并通过PT-PCR获得其or3脂肪酸脱氢酶基因Fat-1,整合入真核表达载体,构建了哺乳动物细胞表达载体pFat-IRES2-GFP,转染牛胎儿成纤维细胞系并对其进行G418筛选获得稳定转染细胞株.对稳定转染Fat-1细胞株的RT-PCR分析及脂肪酸组成的HPLC分析结果表明,Fat-1基因已经整合入牛基因组中,并能够表达和发挥其ω-3脂肪酸脱氢酶的作用,促使ω-6PUFAs转变为相应的ω-3 PUFAs.ω-6脂肪酸总量从35.60%下降到25.47%,ω-3 PUFAs总量从5.75%上升到12.33%,多不饱和脂肪酸的比值从正常细胞中的6.19下降到阳性细胞中的2.0 7,说明Fat-1基因整合是成功的,能够在细胞中以相应的ω-6 PUFAs为底物合成ω-3 PUFAs.