逆转录病毒载体介导的T7RNA聚合酶在猪源细胞PK15及SK6中的稳定表达

• 作者: 刘湘涛 吴锦艳 尚佑军 田宏 郑海学 陈妍 靳野
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 生物学
• 关键词: T7RNA聚合酶基因 逆转录病毒载体 PK15细胞 SK6细胞 稳定表达
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 527-532
• 分类号: Q786
• 字数: 4412字
• 语种: 中文

摘要

本研究旨在利用逆转录病毒载体系统将T7RNA聚合酶基因导入猪源细胞,并对该基因的遗传稳定性进行分析.作者克隆并构建含T7RNA聚合酶基因的逆转录病毒重组载体pBABEpuro/T7.将pBABEpuro/T7与水泡性口炎病毒载体pVSV-G共转染GP2-293细胞,收获重组病毒并用该病毒在Polybrene的介导下分别感染PK15和SK6细胞,用嘌呤霉素筛选阳性细胞克隆.对此阳性细胞进行传代,并对不同代次细胞中的T7RNA聚合酶基因进行扩增,确定其遗传稳定性.用直接荧光法和聚丙烯酰胺凝胶电泳检测细胞中T7RNA聚合酶基因的表达及其活性.结果表明T7RNA聚合酶能够被稳定地整合进靶细胞基因组内,细胞系内的T7RNA聚合酶具有较好的转录活性,其活性传代不减弱.免疫荧光检测发现所表达的T7 RNAP蛋白具有良好的反应原性.本研究表明T7RNA聚合酶基因稳定整合进猪源细胞,该基因的稳定整合为建立高效体内病毒拯救系统提供了良好的工具.