香蕉条斑病毒ORF Ⅰ、ORF Ⅱ酵母双杂交系统诱饵质粒的构建及鉴定

• 作者: 刘志昕 林湛松 王小明 龚殿
• 来源期刊: 热带农业科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 香蕉条斑病毒 酵母双杂交 诱饵质粒 自激活鉴定
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 农业生物技术
• 页码范围: 45-49
• 分类号: Q503|Q939.4
• 字数: 4091字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-2196.2011.06.012

摘要

以连接在pMD-18T载体上的香蕉条斑病毒（BSV）全基因组为模板,PCR扩增得到了带有Gateway R重组反应接头序列的香蕉条斑病毒ORFⅠ及ORFⅡ基因片段,经过BP、LR重组后,构建成带有目的片段的酵母双杂诱饵质粒pDEST32-O1及pDEST32-O2。将质粒转化E.coli DH5α感受态细胞,筛选序列和编码框均正确的重组质粒。将以上2种正确的重组质粒分别与用于构建诱饵质粒的pDEST22空质粒共转化酵母MaV203感受态细胞,利用营养缺陷培养基（SC-Leu-Trp）筛选转化子,并对转化子进行毒性鉴定、自激活鉴定以及3-AT抑制浓度鉴定。结果显示,2种转化子均生长正常,说明所构建的2个重组质粒表达蛋白对酵母无毒性作用,其在特异营养缺陷培养基（SC-Leu-Trp-Ura）中无法生长,不能产生自激活现象,3-AT抑制浓度分别为50、75 mmol/L。以上结果说明所构建的2种诱饵质粒均可用于后续酵母双杂工作,为BSV与宿主的蛋白互作奠定了基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	林湛松	海南大学环境与植物保护学院	3	2	1.0	1.0
2	王小明	海南大学环境与植物保护学院	2	0	0.0	0.0
3	龚殿	海南大学环境与植物保护学院	1	0	0.0	0.0