靶向人Trb3基因shRNA真核表达载体的构建及鉴定

• 作者: 孙传政 张晶 文浩杰 曾木圣 李晓江 李满枝 李科 王虎 蒋玉娥 隋军
• 来源期刊: 中国耳鼻咽喉头颈外科
• 学科: 医学
• 关键词: 头颈部肿瘤 果蝇蛋白质类 RNA干扰 脂质体 真核表达载体
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 60-62
• 分类号: R3
• 字数: 2229字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建并鉴定靶向果蝇同源蛋白3(tribbles-related protein 3,Trb3)基因的短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)真核表达载体,并检测其对靶基因的沉默效应.方法 根据Genbank数据库中Trb3序列,设计、合成3对互补并特异性编码其shRNA序列的寡核苷酸,克隆到线性化的pSUPER.retro.puro质粒载体中,并对重组质粒进行酶切分析及测序鉴定;脂质体介导重组质粒和pSUPER.retro.puro Vector转染舌鳞状细胞癌Tca8113细胞株,RT-PCR和Western-Blot检测其对靶基因Trb3的表达影响.结果 酶切及测序鉴定重组质粒pSUPER.puro-shTrb3序列正确;转染重组质粒后舌鳞状细胞癌Tca113细胞中Trb3 mRNA和蛋白表达水平相对于空载体组明显下降,shRNA可以特异性沉默Trb3基因.结论 成功构建了靶向人Trb3基因的shRNA真核表达载体,为进一步研究Trb3在舌鳞状细胞癌和其他头颈肿瘤中的作用奠定了基础.