转BADH基因苜蓿T-DNA侧翼序列分析及转化事件特异性分析

• 作者: 刘子会 张红梅 张艳敏 李国良 相金英 郭秀林 陈受宜
• 来源期刊: 作物学报
• 关键词: 转基因苜蓿 BADH T-DNA 侧翼序列 事件特异性检测
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 页码范围: 397-404
• 分类号: S5
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1006.2011.00397

摘要

为了从分子水平上鉴别不同的转基因株系,以转BADH基因苜蓿的To代基因组DNA为模板,采用热不对称交错PCR(TAIL-PCR)方法分离其外源基因插入位点的侧翼序列,获得了B127株系的左翼序列和右翼序列,以及B125、B138、B295和B196株系的左翼序列.侧翼序列特征分析表明,有的T-DNA边界序列被删除,有的边界序列被保留,并填充了一段未知来源的核苷酸序列.根据侧翼序列中插入载体序列和紧邻插入序列的基因组序列特征,分别设计PCR扩增的上、下游引物,并对获得的42个转BADH株系分别进行左、右翼序列的扩增,结果表明,转基因植株B106、B125、B138、B157、B158、B289、B295、B305和B127具有相同的扩增条带,B203、B220、B223和B196具有相同的扩增条带,说明这些株系可能仅来源于2个转化事件.本研究建立的事件特异性检测方法可以准确地将不同的转化株系区别开来.