禽网状内皮增生症病毒gp90蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

• 作者: 全炎铭 崔红玉 张晶 王云峰 王玫 石星明 胡顺磊 赵妍 闫帅 魏秀英
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 禽网状内皮增生症病毒 gp90基因 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2011,（9）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 1289-1294
• 分类号: S852.659.3
• 字数: 4547字
• 语种: 中文

摘要

为获得分泌抗禽网状内皮增生症病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞,通过表达pET32a-gp90重组蛋白,以纯化的gp90蛋白为抗原,免疫BALB/c鼠,筛选分泌抗REV McAb的杂交瘤细胞株.经过细胞的融合及筛选,共获得能稳定分泌抗REV gp90的McAb细胞系2株,分别命名为A9E8和B3F8.2株细胞培养上清的效价均在1:4×102以上,腹水效价均在1∶8×103以上.亚型鉴定结果表明,2株皆为IgG型,轻链均为k链;Western blot及间接免疫荧光结果显示,这2株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体均能识别REV全病毒抗原,与其发生特异性反应,并且不与禽类其他病毒发生反应;病毒中和试验结果表明,获得的单克隆抗体均能REV临床分离株发生中和反应,具有较好的中和活性.利用制备的单克隆抗体建立了REV的间接免疫荧光检测方法,临床病料检测结果表明,该方法与病毒分离及PCR的检测结果基本一致,阴、阳性符合率分别为100％和90％.作者制备了针对REV gp90的McAb,为REV的快速诊断及抗原表位分析与鉴定等奠定了基础.