不结球白菜热激蛋白BcHSP81-4基因原核表达及生物信息学

• 作者: 侯喜林 刘同坤 孙菲菲 张蜀宁 李英 王枫
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 不结球白菜 BcHSP81-4 原核表达 生物信息学
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 所属期刊栏目: 园艺
• 页码范围: 617-622
• 分类号: S634.3
• 字数: 4827字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2011.03.028

摘要

从不结球白菜Pol_CMS胞质不育系SSH差减文库中得到1条热激蛋白基因的EST序列，通过对该基因的NCBI网上BLAST比对发现，与热激蛋白的同源性最高，与拟南芥HSP81-4(AT5G56000)同源性高达96％，命名为BcHSP81-4。将BcHSP81-4基因片段连接到原核表达载体PGEX-4T-3，转化大肠杆菌BL21(DE3)后诱导重组蛋白的表达。经IPTG诱导后进行SDS-PAGE电泳，产生了预期大小的重组蛋白，进一步证明了该基因属于热激蛋白90家族。并采用生物信息学方法，利用多种在线软件对不结球白菜热激蛋白BcHSP81-4的理化性质、亲水性、跨膜区、亚细胞定位及蛋白质结构进行预测和分析。理化性质分析结果显示，该蛋白质含699个氨基酸，分子量为80 050，理论等电点pI值为4.95。TMpred跨膜分析结果显示，它含有1个显著的跨膜螺旋区，这个区域与ProtScale预测的疏水区基本对应。用TargetP server和WOLFPSORT server程序预测该蛋白质为细胞质蛋白质，二级结构以α-螺旋和随机卷曲为主。