p21基因在牛卵成熟中的表达检测及其真核表达载体构建

• 作者: 云彦 吴苏君 杨文琳 赵贵民 雷安民
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 牛卵母细胞 p21基因 体外转录 显微注射
• 年，卷（期）: 2011,（8）
• 所属期刊栏目: 遗传繁育
• 页码范围: 1071-1080
• 分类号: S823|Q344.13
• 字数: 5855字
• 语种: 中文

摘要

本研究旨在检测p21基因在牛卵成熟过程中的表达,并构建其真核表达载体.首先利用RT-PCR和免疫荧光染色对不同成熟阶段牛卵内p21的mRNA和蛋白表达进行检测.然后从牛成纤维细胞中克隆了p21基因并构建pVenus-P21真核表达载体.经脂质体2000介导重组质粒pVenus-P21转染Hela细胞,通过荧光显微镜观察、RT-PCR检测,确认重组质粒在Hela细胞内的表达及定位.最后应用体外转录试剂盒将p21-venus体外转录为cRNA,并注射牛卵母细胞,荧光显微镜下观察其表达及定位.结果显示,在牛卵体外成熟过程中,各时期均存在p21基因mRNA及蛋白的表达.构建的真核表达载体pVenus-P21能够在Hela细胞中正确表达及定位.p21-ve-nus cRNA显微注射牛卵后其融合蛋白也能实现准确定位,为研究P21在卵母细胞成熟以及胚胎发育过程中的作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	雷安民		26	174	6.0	13.0