重组融合蛋白BoNT-LH(N)-Elafin在毕赤酵母中的表达及其活性

• 作者: 余红梅 周向东 尤列·皮尔曼 李琪 维克多·科罗索夫
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 芽孢神经毒素类肉毒毒素 Elafin 中性粒细胞弹性蛋白酶 重组融合蛋白质类 SNARE 毕赤酵母
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 389-393
• 分类号: Q786
• 语种: 中文

摘要

目的 利用毕赤酵母表达系统表达BoNT-LH(N)-Elafin融合蛋白,并检测其生物学活性.方法 构建pPIC9K-BoNT-LH(N)-Elafin重组真核表达质粒,转化毕赤酵母GS115菌株,甲醇诱导表达,取上清,经阳离子交换层析纯化融合蛋白,并检测其反应原性、抗弹性蛋白酶活性及对SNARE蛋白复合体的裂解作用.结果 重组表达质粒pPIC9K-BONT-LH(N)-Elafin经双酶切及测序证实构建正确;表达的BoNT-LH(N)-Elafin融合蛋白相对分子质量约为110 000,纯化的融合蛋白纯度达92%,浓度为54 mg/L,反应原性良好,具有抗弹性蛋白酶活性及裂解SNARE蛋白复合体的作用.结论 已在毕赤酵母GS115中成功表达了重组融合蛋白BoNT-LH(N)-Elafin,该融合蛋白具有良好的生物学活性,为进一步研究其抑制气道黏液高分泌的机制奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周向东	重庆医科大学附属第二医院呼吸内科	235	1426	17.0	27.0
2	李琪	重庆医科大学附属第二医院呼吸内科	34	222	7.0	13.0
3	余红梅	重庆医科大学附属第二医院呼吸内科	14	36	4.0	5.0