重叠PCR法构建副猪嗜血杆菌外源打靶基因

• 作者: 储岳峰 张念章 贺英 赵萍 逯忠新 高鹏程
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 生物学
• 关键词: 副猪嗜血杆菌 重叠PCR 外源打靶基因
• 年，卷（期）: 2011,（7）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 186-190
• 分类号: Q785
• 字数: 3669字
• 语种: 中文

摘要

利用重叠PCR法构建了包含副猪嗜血杆菌血清5型hhdA基因上、下游同源臂(H-up、H-down)和卡那霉素抗性基因(Kan)的外源打靶基因Hup-kan-Hdown.通过对反应条件进行优化,发现退火温度为50.5℃,加入H-up、H-down和Kan各为5μL(450 ng)时得到Hup-kan-Hdown的量最多.将此外源打靶基因的两端引入Pst Ⅰ和SacⅠ酶切位点,克隆至具有迁移作用的自杀质粒pDS132,构建了可在大肠杆菌E.coli SM10-λpir中稳定遗传的打靶载体,为下一步建立副猪嗜血杆菌的高效基因打靶系统奠定基础.