幽门螺杆菌NCTC11637株Hp1501蛋白的原核表达与纯化

• 作者: 于拽拽 冯莉 敬保迁 杨继文 杨致邦 熊玉霞 王朝丽
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 幽门螺杆菌 Hp1501基因 生物信息学 原核细胞 基因表达 纯化
• 年，卷（期）: 2011,（12）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1421-1424
• 分类号: R378|Q786
• 语种: 中文

摘要

目的 原核表达并纯化幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Ⅱ.pylori)NCTC 11637株Hp1501蛋白.方法 PCR扩增H.pylori NCTC11637株Hp1501基因编码功能区序列Hp1501a,定向克隆至pQE30载体,构建重组原核表达质粒pQE30-Hp1501a,转化E.coli XL1-blue,IPTG诱导表达,并分析重组蛋白的表达形式.用Ni-NTA His柱对重组蛋白进行纯化.结果 重组表达质粒pQE30-Hp1501a经双酶切鉴定构建正确,测序分析表明插入基因序列完全正确；表达的重组蛋白相对分子质量约为37 000,表达量约占菌体总蛋白的21％,主要以包涵体形式存在,可与兔抗His单克隆抗体特异性结合；纯化的重组蛋白纯度达91％.结论 成功原核表达并纯化了H.pylori NCTC11637株Hp1501蛋白,为H.pylori外膜蛋白的生物学功能和疫苗的研究奠定了基础.