双重TaqMan实时荧光嵌套PCR快速检测α地中海贫血SEA缺失方法的建立与应用

• 作者: 刘运科 周万军 袁晓文 黄骞
• 来源期刊: 中华检验医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: α地中海贫血 基因缺失 聚合酶链反应
• 年，卷（期）: 2011,（8）
• 所属期刊栏目: 血液与体液学
• 页码范围: 681-685
• 分类号: R446.9
• 字数: 4638字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2011.08.003

摘要

目的 建立一种快速检测α地中海贫血(α地贫)SEA缺失的双重TaqMan实时荧光嵌套PCR方法.方法 收集2010年5-7月在广州市天河区妇幼保健院进行地贫筛查的外周血标本100份,2010年12月至2011年2月东莞东华医院进行产前诊断的胎儿标本7份(绒毛2份、羊水5份).从本实验室样本资源库中选取α地贫SEA缺失已知基因型标本50份.采用双重TaqMan实时荧光嵌套PCR技术,于同一检测体系同时检测各标本d地贫SEA缺失截短序列及缺失范围内正常序列,根据荧光PCR阳性扩增结果结合其Ct值差异诊断受检个体的α地贫SEA缺失基因型.同时采用检测α地贫SEA缺失的常规gap-PCR法,以PCR扩增结合产物凝胶电泳分析各标本α地贫SEA缺失基因型,以验证及对比分析新方法的准确性与实用性.结果 所建立的双重TaqMan实时荧光嵌套PCR优化体系中2个PCR的扩增效率分析曲线的斜率分别为-3.153(SEA缺失截短目的 片段)和-3.182(正常内参序列),扩增效率均接近100%.应用此方法检测50份α地贫SEA缺失已知基因型标本,结果显示该方法不但能实现其快速分子诊断,而且能准确判断受检标本中的外源性污染,从而有效避免假阴性或假阳性误诊.100份外周血标本中,两种方法分别检出SEA缺失标本11份,对比分析两方法的诊断符合率为100%.7份胎儿标本中,gap-PCR法检出SEA缺失3份,而本方法则检出SEA缺失标本2份、受-SEA/αα母源性污染的基因型为αα/αα的绒毛标本1份.结论 本研究建立的双重TaqMan实时荧光嵌套PCR可以快速准确检测α地贫SEA缺失,操作简单实用,适合大规模人群筛查和常规分子诊断.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	袁晓文	南方医科大学医学遗传学教研室	5	23	3.0	4.0
2	周万军	南方医科大学医学遗传学教研室	22	91	6.0	9.0
3	刘运科	广州市天河区妇幼保健院检验科	3	24	3.0	3.0
4	黄骞	南方医科大学医学遗传学教研室	1	8	1.0	1.0