绵羊肺腺瘤病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

• 作者: 么宏强 斯日古楞 王升启 马学恩
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 农学
• 关键词: 绵羊肺腺瘤病毒 实时荧光定量PCR TaqMan探针 前病毒DNA
• 年，卷（期）: 2011,（7）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 6-11
• 分类号: S852.3
• 字数: 5802字
• 语种: 中文

摘要

为建立检测绵羊肺腺瘤病毒(Jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV)实时荧光定量PCR( Real-time qPCR)方法,根据外源性JSRV-NM株env基因序列,选其保守序列作为目的片段,设计引物和TaqMan探针,以自然病例的肺肿瘤组织基因组DNA为模板,经PCR扩增目的基因、克隆,重组质粒鉴定,并严格定量后,梯度稀释作为阳性标准品,优化反应条件进行Real-time qPCR扩增,获得的标准曲线为:Y=-3.308X+47.848,线性相关系数为0.991；Ct值变异系数小,并且灵敏度高,初步建立了检测JSRV前病毒DNA的Real-time qPCR方法.应用该方法对不同来源(A、B、C、D、E组)的绵羊外周血及其他组织样品进行测定其前病毒载量.结果显示B组和C组外周血白细胞、肺脏、肺门淋巴结以及鼻液中检测均为阳性,并发现前病毒DNA的载量在肺脏中明显高于外周血白细胞；D组虽未发现有绵羊肺腺瘤(SPA)临床症状,但在肺门淋巴结里可以检测到；E组中1只绵羊的肺脏也检出低拷贝数的前病毒DNA,而在A组中检测结果均为阴性.本研究对检测未知羊群JSRV感染程度及研究SPA流行病学等均有重要意义.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	斯日古楞	内蒙古农业大学动物科学与医学学院	57	192	6.0	12.0
2	马学恩	内蒙古农业大学动物科学与医学学院	87	464	11.0	17.0
3	么宏强	内蒙古农业大学动物科学与医学学院	30	58	4.0	6.0
4	王升启		7	12	2.0	2.0