重组人促卵泡激素在CHO细胞中的表达

• 作者: 何太平 唐菁燕 宋春雷 徐珑 杨波 聂艳桃 谭晓晶 雷韬
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 促卵泡激素 异二聚体糖蛋白 C HO细胞 培养基,无血清
• 年，卷（期）: 2011,（12）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1409-1412
• 分类号: Q57|Q786
• 语种: 中文

摘要

目的 在CHO细胞中表达重组人促卵泡激素(Follicle-stimu lating hormone,FSH).方法 用内部核糖体进入位点序列(IRES)将FSH α和β亚基在基因水平上进行拼接,并在同一启动子的控制下构建重组真核表达质粒pcDNA5/dhfr/FSH,转染CHO细胞,筛选并建立稳定表达工程细胞株,并对工程细胞的生长和表达进行分析.结果 重组真核表达质粒pcDNA5/dhfr/FSH经双酶切和测序证明构建正确；转染CHO细胞获得高的阳性克隆率(80.65％),经MTX加压和克隆筛选获得稳定表达工程细胞株D5;D5细胞株在无血清摇瓶批次培养中FSH的表达量为2.5 IU/ml,在培养参数可控的生物反应器中FSH的表达量为摇瓶中的2倍多,达6 IU/ml.结论 建立了一种在CHO细胞中表达异二聚体糖蛋白的方法,获得的工程细胞适应无血清培养且易于扩大培养,在生物反应器中可获得高的表达量,且具有进一步优化提高表达量的潜力.