Flt3配体胞外域的原核表达纯化及对脐血CD34+细胞的扩增作用

• 作者: 刘利 刘强 尹郸丹 梁英民 赵星成 郑瑾 郝淼旺 陈任安
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: Flt3配体 CD34+ hFLext Trx-hFLext 载体
• 年，卷（期）: 2011,（19）
• 所属期刊栏目: 研究与报告
• 页码范围: 3476-3480
• 分类号: R394.2
• 字数: 5163字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2011.19.013

摘要

背景:Fms 样酪氨酸激酶3配体(Flt3配体)是一种重要的生长因子,通过激活特定的酪氨酸激酶受体,调控造血细胞的生长、生存和/或分化,具有促进造血干细胞体外扩增的应用潜力.目的:构建pET32a(+)-hFLext原核表达载体,表达、纯化hFLext蛋白,观察其对脐血CD34+细胞的扩增作用.方法:克隆hFLext,构建pET32a(+)-hFLext重组表达载体.转化大肠杆菌 BL21,IPTG诱导蛋白表达,镍珠亲合层析纯化蛋白.磁珠分选脐血CD34+细胞,单独加入hFLext或联合干细胞因子、血小板生成素孵育1周,观察体外扩增作用.结果与结论:成功克隆hFLext,并构建了pET32a(+)-hFLext重组表达载体.在大肠杆菌BL21成功表达Trx-hFLext融合蛋白,经8 mol/L尿素变性包涵体蛋白,逐步透析复性,镍珠亲合层析纯化蛋白,成功获得高纯度的Trx-hFLext融合蛋白.Trx-hFLext融合蛋白不仅具有维持及轻度刺激CD34+细胞体外扩增的作用,并且与干细胞因子及血小板生成素具有协同作用,为造血干/祖细胞体外扩增研究奠定了基础.