利用酵母双杂交法检测甘蓝SCR与SRK之间的相互作用

• 作者: 张贺翠 彭一波 朱利泉 李成琼 杨昆 杨红 王小佳 罗兵 薛丽琰 陈松
• 来源期刊: 作物学报
• 关键词: 甘蓝 S位点受体激酶(SRK) S位点富含半胱氨酸蛋白(SCR) 酵母双杂交
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种·种质资源·分子遗传学
• 页码范围: 579-586
• 分类号: S635
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1006.2011.00579

摘要

为深入研究甘蓝S位点受体激酶(SRK)和S位点富含半胱氨酸蛋白(SCR)间相互识别的分子机理,以具有典型自交不亲和性的甘蓝D3为材料,利用巢式PCR分别扩增SRK胞外域(eSRK)和SCR,通过酵母双杂交检测二者之间的相互作用,并利用同源重组技术将eSRK与GAL4报告基因DNA活化域融合(pGADT7eSRK)以及SCR与GAL4报告基因DNA结合域融合(pGBKT7SCR).两种重组质粒分别转化酵母Y187和Y2HGold后未出现自激活现象.融合的二倍体酵母(pGADT7eSRK×pGBKT7SCR)能在选择性固体培养基(SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp/X-a-Gal/AbA)上生长,并且菌落呈蓝色.结果表明,eSRK与SCR蛋门能够相互结合,为深入研究二者作用位点成功建立了一个技术平台.