新型树突状细胞疫苗的构建及功能的初步鉴定

• 作者: 于津浦 任秀宝 李慧 杨莉莉 霍佳 魏枫
• 来源期刊: 天津医药
• 关键词: 细胞因子信号转导蛋白抑制因子 HMGB1蛋白质 树突细胞 癌症疫苗 质粒 转染 基因表达
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 318-321
• 分类号: R392.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0253-9896.2011.04.012

摘要

目的:构建可同时实现沉默细胞因子信号抑制因子1(SOCS1)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)刺激和肿瘤相关抗原负载的新型树突状细胞(DC)疫苗.方法:构建沉默SOCS1并共表达HMGB1及肿瘤相关抗原NY-ESO-1的质粒(p/shS1-NY-IRES-sig-HMGB1).体外诱导单核细胞分化为DC,将p/shS1-NY-IRES-sig-HMGB1转染入DC细胞.同时设立未转染组、shNC/GFP转染组和p/shS1-NY-IRES-sig-HMGB1转染组.PCR和Westernblot验证基因及蛋白表达后,酶联免疫吸附(ELISA)法检测DC细胞分泌的肿瘤坏子因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-12、IL-1及IL-6的变化.结果:经测序证实所构建质粒序列与预期序列一致,酶切和PCR验证质粒结构正确.成功将p/shS1-NY-IRES-sig-HMGB1转染入DC细胞,并在基因和蛋白水平验证NY-ESO-1的正确表达,HMGB1可在胞浆内表达.SOCS1 shRNA质粒shS可沉默SOCS1表达.p/shS1-NY-IRES-sig-HMGB1转染组DCTNF-α、IL-12、IL-1及IL-6分泌量较未转染组和shNC/GFP转染组升高(P<0.05).结论:成功构建可同时实现沉默SOCS1、HMGB1刺激和肿瘤相关抗原负载的新型DC疫苗.