草鱼呼肠孤病毒HZ08株VP4蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备

• 作者: 刘宝芹 刘永奎 吴淑勤 张乐生 曾令兵 曾伟伟 王庆 石存斌
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 农学
• 关键词: 呼肠孤病毒 草鱼 VP4蛋白 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2011,（12）
• 所属期刊栏目: 诊断制品
• 页码范围: 1482-1485
• 分类号: S941.41+1|R392-33
• 语种: 中文

摘要

目的 原核表达、纯化草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)HZ08株VP4蛋白,并制备其多克隆抗体.方法 采用PCR法扩增GCRV HZ08株S6基因部分节段,插入原核表达载体pET-32a(+),构建重组表达质粒pET-32a-S6,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达.表达的重组蛋白纯化后免疫新西兰白兔,制备多克隆抗体,采用间接ELISA法测定其效价,Western blot鉴定其特异性.结果 重组表达质粒经双酶切及测序证实构建正确；表达的目的蛋白相对分子质量约为51 000,表达量占菌体总蛋白的73％,主要以包涵体形式表达,反应原性良好；制备的多克隆抗体效价约为1:8000,且具有较高的特异性.结论 成功制备了GCRV HZ08株VP4蛋白高效价多克隆抗体,为VP4蛋白功能的深入研究、抗原表位分析、草鱼出血病诊断方法的建立及相关基因工程疫苗的研发奠定了基础.