大肠杆菌O157:H7实时定量PCR检测方法的建立

• 作者: 彭昊 李军 杨威 潘艳 禤雄标 胡帅 许力干 谢宇舟 谢永平 陈泽祥 马春霞
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 农学
• 关键词: 大肠杆菌O157:H7 实时定量PCR Flic(H7)基因
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 5-9
• 分类号: S852.612
• 字数: 3598字
• 语种: 中文

摘要

根据GenBank公布的大肠杆菌O157:H7的Flic(H7)基因序列进行同源性比较分析,选择保守序列设计一对特异性扩增引物,通过优化反应条件,建立一个用于大肠杆菌O157:H7快速定量检测的实时定量PCR方法.该方法的最低检测极限是103CFU/mL,敏感性比常规PCR提高10倍.方法重复性好、特异性强,重复性检测的变异系数均小于2%;只能检测大肠杆菌O157:H7,对非大肠杆菌O157:H7血清型细菌、猪链球菌2型、副猪嗜血杆菌无反应.利用此方法对模拟样本进行定量检测,其结果与平板细菌计数基本一致,表明此方法可作为大肠杆菌O157:H7快速诊断和疫情监测的一种快速、准确、简便的检测工具.