酶切富集联合DHPLC检测肿瘤患者外周血EGFR和KRAS基因突变及其临床应用

• 作者: 崔巍 张旭 杨卓 王斐 苏秀兰 赵保健 郭野 陈倩 黄媛 龙美娟
• 来源期刊: 中华检验医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 癌,非小细胞肺 结直肠肿瘤 受体,表皮生长因子 原癌基因蛋白质类 突变 色谱法,高压液相
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 新技术与新方法
• 页码范围: 327-332
• 分类号: R73
• 字数: 5205字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2011.04.008

摘要

目的 建立一种REDE-DHPLC检测外周血肿瘤游离核酸EGFR、KRAS基因突变的方法,并探讨其临床应用价值.方法 采用限制性内切酶Mse Ⅰ、Msc Ⅰ、BstN Ⅰ和BglⅠ分别切断EGFR基因第19、21号外显子和KRAS基因第12、13号密码子的野生型片段以富集突变片段,建立检测血浆EGFR和KRAS基因突变的REDE-DHPLC法,并采用50%、10%、5%、1%和0.1%稀释度的质粒标准品评价REDE-DHPLC法和传统DHPLC法的检测灵敏度.然后,采用REDE-DHPLC法检测120例NSCLC和120例结直肠癌患者血浆和石蜡组织标本中的EGFR和KRAS基因突变.同时,用传统DHPLC法和测序法进行平行检测,以评价REDE-DHPLC法检测NSCLC和结直肠癌患者血浆中2个基因突变的诊断效能.结果 REDE-DHPLC法对EGFR和KRAS基因4个突变位点检测的灵敏度均达0.1%,传统DHPLC法检测灵敏度均为1.0%,REDE-DHPLC法对含0.1%突变的质粒标准品重复2～3次检测均为阳性.REDE-DHPLC法、传统DHPLC法和测序法检测120例NSCLC患者血浆EGFR基因总突变率分别为27.5%、16.7%和12.5%,检测120例结直肠癌患者血浆KRAS基因总突变率分别为38.3%、25.8%和16.7%.REDE-DHPLC法检测EGFR和KRAS基因总突变率均高于传统DHPLC法(x2值分别为4.092、4.301,P均＜0.05)和测序法(x2值分别为8.438、14.127,P均＜0.05);将REDE-DHPLC法检测EGFR和KRAS基因突变与传统DHPLC法相比,敏感度均为100%(20/20,31/31),特异度分别为87.0%(87/100)和83.2%(74/89);与测序法相比,敏感度均为100%(15/15,20/20),特异度分别为82.9%(87/105)和74.0%(74/100).REDE-DHPLC法与传统DHPLC法检测EGFR、KRAS基因突变的符合率分别为89.2%(107/120,Kappa=0.690,P＜0.05)和87.5%(105/120,Kappa=0.718,P＜0.05).REDE-DHPLC检测血浆与组织标本中EGFR和KRAS基因总突变符合率分别为91.7%(33/36,Kappa=0.939,P＜0.05)和90.2%(46/51,Kappa=0.914,P＜0.05).结论 REDE-DHPLC法灵敏度和特异性高,结果易判读,且可有效避免纯合点突变漏检,有望成为临床实验室外周血EGFR和KRAS基因突变检测的推广方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	苏秀兰	内蒙古医学院临床医学研究中心	236	1248	18.0	24.0
2	郭野	中国医学科学院北京协和医院检验科	11	25	3.0	4.0
3	黄媛	中国医学科学院北京协和医院检验科	4	18	2.0	4.0
4	陈倩	中国医学科学院北京协和医院检验科	21	108	5.0	9.0
5	杨卓	中国医学科学院北京协和医院检验科	3	14	2.0	3.0
6	龙美娟		1	12	1.0	1.0
7	王斐	中国医学科学院北京协和医院检验科	1	12	1.0	1.0
8	赵保健		2	23	2.0	2.0
9	张旭		2	23	2.0	2.0