P53结合位点对人NOD8基因的调控

• 作者: 唐清亮 张芸 曾琪 柏志全 田莉 胡巢凤
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 启动子 基因,NOD8 P53 结合位点 核苷酸结合寡聚结构域样受体
• 年，卷（期）: 2011,（12）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 2362-2367
• 分类号: R363
• 字数: 6171字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2011.12.023

摘要

目的:探讨P53结合位点在NOD8基因调控中的作用.方法:利用生物信息学方法,我们发现人与黑猩猩的NOD8基因核心启动子区域相似位置含有P53结合位点;以人基因组DNA为模板,PCR扩增含有人NOD8基因序列,构建含有/缺失人P53结合位点的NOD8基因启动子驱动的、表达绿色荧光蛋白-NOD8融合蛋白的质粒pNOD8(760 bp)-EGFP-NOD8和mpNOD8(750 bp)-EGFP-NOD8;将构建的重组质粒经阳离子聚合物JetPeiTM介导瞬时转染HEK293细胞中,并加入不同浓度的P53抑制剂pifithrin alpha(PFT-α)处理HEK293细胞,用RT-PCR和Westren blotting 方法检测NOD8 mRNA和蛋白的表达;此外,用pNOD8(760 bp)-EGFP质粒转染HEK293细胞,利用染色质免疫共沉淀法(ChIP)观察P53是否与NOD8启动子结合.结果:经酶切鉴定和序列测定证实重组质粒构建成功.ChIP实验证实P53能与NOD8启动子结合.pNOD8 (760 bp)-EGFP-NOD8 转染组中NOD8 mRNA的表达显著高于pEGFP-C2转染组(P＜0.05),并且NOD8 mRNA 在缺失人P53结合位点的mpNOD8 (750 bp)-EGFP-NOD8转染组中的表达明显降低(P＜0.01);同时发现加入 PFT-α的pNOD8(760 bp)-EGFP-NOD8 转染组NOD8 mRNA的表达显著下降,并呈剂量依赖关系,其中90 μmol/L PFT-α对NOD8 mRNA表达的抑制作用最为显著(P＜0.01).与mRNA检测结果一致的是pNOD8(760 bp)-EGFP-NOD8 转染组NOD8蛋白的表达量显著高于对照组pEGFP-C2;而mpNOD8(750 bp)-EGFP-NOD8转染组NOD8蛋白的表达量明显低于pNOD8(760 bp)-EGFP-NOD8转染组和加入 PFT-α的pNOD8(760 bp)-EGFP-NOD8 转染组(P＜0.01).结论:P53结合位点在NOD8基因调控中起着重要的作用,并且P53结合位点与NOD8基因之间可能存在正反馈调节.