构建LEF1基因毛囊特异表达载体并稳定转染胎儿成纤维细胞

• 作者: 侯鑫 刘东军 张涛 李彬 王志钢 王潇 郭旭东 鲍文蕾
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 农学
• 关键词: 内蒙古白绒山羊 淋巴样增强因子-1 毛囊特异性表达载体 稳定转染
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 141-145
• 分类号: S8
• 字数: 4247字
• 语种: 中文

摘要

旨在构建内蒙古白绒山羊(Capra hircus)淋巴样增强因子-1(Lymphoid enhancer factor,LEFT)基因真核表达载体并转染胎儿成纤维细胞,获得稳定表达红色荧光蛋白及毛囊特异性表达LEFI的转基因细胞克隆.以pCDsRed2载体为基本骨架将LEFT基因亚克隆到KAP6-1启动子下游,连接红色荧光蛋白表达元件,构建LEFT基因毛囊特异表达载体pCDsRedKL.外源表达载体以lipofectamineT"2000介导转染胎儿成纤维细胞,通过G418筛选获得稳定转染的细胞克隆.PCR鉴定外源基因在细胞基因组中的整合.测序显示构建的表达载体pCDsRed-KL序列中,LEF1基因正确连接在KAP6-1启动子下游,顺序连接CMV启动子和红色荧光蛋白基因,载体构建正确.脂质体介导的稳定转染效率约为14.0%,经G418筛选得到高效表达红色荧光蛋白转基因细胞克隆.PCR检测显示外源KAP6-1启动子和LEFI基因整合到胎儿成纤维细胞基因组中.