人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白重组CHO细胞生产工艺及质控方法的建立

• 作者: 刘亚楠 吴建国 唐亮 宋红梅 宓现强 曹传平 朱军峰 管晏清 郑玲莉 陈晓虹 陶群 鞠佃文
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 受体,肿瘤坏死因子,Ⅱ型 抗体 重组融合蛋白质类 CHO细胞 生产工艺 质量控制
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 70-74
• 分类号: R392-33
• 语种: 中文

摘要

目的 利用国产无血清培养基T22,建立人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白(rhTNFR:Fc)重组CHO细胞大规模生产工艺及质控方法.方法 用500 L生物反应器培养重组CHO细胞,通过深层过滤、亲和层析、离子交换层析、疏水层析等方法纯化表达上清中的目的 蛋白,超滤浓缩制成原液,并按照<中国药典>三部(2010版)及现有的质控方法和标准建立相应的质控方法.结果 重组CHO细胞在500 L生物反应器中培养15 d左右,细胞密度最高可达8.6×106个/ml,收获时细胞活力为70%左右,rhTNFR:Fc蛋白表达量可达3.3 g/L;纯化的目的 蛋白纯度可达98%以上,总收率超过30%;各项质量指标均符合新药申报标准.结论 建立的rhTNFR:Fc重组CHO细胞生产工艺及质控方法稳定可靠,使用国产培养基大大降低了生产成本.